在實(shí)施GMP過(guò)程中，都遇到一個(gè)難題，就是如何進(jìn)行清潔驗(yàn)證。按GMP要求，企業(yè)必須對(duì)制藥設(shè)備的清潔方法進(jìn)行驗(yàn)證，以確認(rèn)清潔方法的有效性。但依照目前國(guó)內(nèi)現(xiàn)有的技術(shù)水平，很難找到一種合適的驗(yàn)證方法。國(guó)外進(jìn)行清潔驗(yàn)證，比較常用的驗(yàn)證方法主要有HPLC法、uv，Vis分光驗(yàn)證料和清潔劑的理想方法。TOC法的靈敏度可達(dá)億分之一，而且與HPLC法和uv，W8分光光度法相比．具有不需摸索活性成分的檢測(cè)方法和考慮樣品的因素，較為省時(shí)等優(yōu)點(diǎn)。，注射用水和純化水的標(biāo)準(zhǔn)中采用了TOC法測(cè)定有機(jī)物含量。將其方法簡(jiǎn)單修改后可用于清潔驗(yàn)證。

TOC法包括碳的氧化和檢測(cè)生成的二氧化碳兩個(gè)過(guò)程。現(xiàn)有多種氧化技術(shù)，包括光觸酶氧化、化學(xué)氧化及高溫灼燒等。應(yīng)用TOC法Ⅲ進(jìn)行清潔驗(yàn)證的方法做一簡(jiǎn)單介紹，以供參考。在驗(yàn)證中采用的是自行生產(chǎn)的測(cè)定儀，配有自動(dòng)取樣toc測(cè)定儀器檢鋇j儀的檢測(cè)原理是根據(jù)直接往水樣中滴加磷酸并調(diào)節(jié)pH至2—3左右。在此pH條件下，樣品中的所有無(wú)機(jī)碳會(huì)以C0，的形式釋放出來(lái)，進(jìn)入氨氣載氣中，直接被一個(gè)非色散的紅外線探測(cè)器(帥m)檢測(cè)此時(shí)，假想樣品中剩余的碳已全部為有機(jī)碳，在紫外照射條件下，向樣品中加入過(guò)硫酸鈉氧化劑，樣品中剩余的碳都被氧化成C0，根據(jù)NDIR測(cè)得的C0，的量可確定水樣中的總有機(jī)碳量。

對(duì)于設(shè)備清潔驗(yàn)證，主要有兩種TOC取樣技術(shù)一種是用棉簽直接在設(shè)備表面擦拭取樣，另一種則是用高純化水最終清洗設(shè)備，對(duì)清洗液取樣進(jìn)行檢測(cè)。通常，對(duì)設(shè)備表面直接取樣可顯示取樣部位的真實(shí)清潔程度。本次研究的目的就是通過(guò)對(duì)不銹鋼表面上不同有機(jī)殘留物的檢測(cè)來(lái)證明1Dc法的有效性及評(píng)價(jià)測(cè)定儀的效能。考核的參數(shù)包括線性、檢測(cè)限、定量限、準(zhǔn)確度、精確度以及擦拭回收率。

1 線性

TOE法測(cè)定的化合物濃度與測(cè)定儀檢測(cè)數(shù)據(jù)之間應(yīng)存在一種線性關(guān)系。現(xiàn)選用4種不同清潔劑來(lái)考察線性：CIP一1130 (堿性)、CIP一200 (酸性)、Alconox(乳化劑)、Triton—X100 (潤(rùn)濕劑)。結(jié)果相關(guān)系數(shù)范圍從0．9787到0．9998。由于易產(chǎn)生泡沫，泡沫會(huì)使測(cè)定的結(jié)果偏低于真實(shí)值．同時(shí)另取3個(gè)活性成分進(jìn)一步進(jìn)行線性考查：輔料(蔗糖)、抗生素(萬(wàn)古霉素)和內(nèi)毒素，結(jié)果3種化合物都顯示出良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)從0．9996到0．9998。

2 檢測(cè)限和定量限

采用空白試驗(yàn)法來(lái)確定TOE 法檢測(cè)限(MDL)。試驗(yàn)中的清洗液為低TOC水(<25 X1O|9)，將1O個(gè)已清潔小玻璃瓶灌滿低TOE水，每個(gè)小玻璃瓶?jī)?nèi)放入一個(gè)棉簽(切除末端)將溶液渦流振蕩，并在檢測(cè)前放置1h．每個(gè)小瓶測(cè)4次．將4個(gè)檢測(cè)結(jié)果平均，再將1O個(gè)空白小瓶的平均測(cè)定值平均，然后計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)偏差。相對(duì)于自由度為n～1時(shí)，用標(biāo)準(zhǔn)偏差乘以自由度為9、置信限為99％時(shí)的f值(3．25，n=lO)確定TOE法的檢測(cè)限(MDL)，經(jīng)計(jì)算MDL為50X10一，將MDL乘以3可得到定量限為150X 10一。